細(xì)胞支原體污染PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)地:美國(guó)Southern Biotech Associates,Inc. （SBA）

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

• 用于特異性檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體的污染
• 用于擴(kuò)增支原體基因組中16S rRNA編碼區(qū)
• 特殊的引物設(shè)計(jì)擴(kuò)增用于覆蓋支原體的三大類（Mycoplasma,Acholeplasma and Ureaplasma）,因此可檢測(cè)超過95%的潛在的細(xì)胞污染。
• 檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，3小時(shí)內(nèi)出結(jié)果。
• 檢測(cè)靈敏度高：可檢測(cè)到100ul細(xì)胞上清液中2-5毫微微克的支原體DNA。
• 特異性高，只擴(kuò)增細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體DNA，而真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA被擴(kuò)增。
• 試劑盒帶有陽性對(duì)照用于驗(yàn)證PCR體系的穩(wěn)定性。
• 試劑盒內(nèi)帶有內(nèi)參對(duì)照，用于排除PCR抑制劑引起的假陰性。

試劑盒用于擴(kuò)增的支原體種屬及對(duì)應(yīng)PCR產(chǎn)物對(duì)照片段

結(jié)果分析：

• 細(xì)胞如被支原體污染，可擴(kuò)增到448-611bp一條或多個(gè)條帶
• 樣本中包含內(nèi)參的DNA將會(huì)擴(kuò)增出270bp的PCR片段（見圖，泳道7），該擴(kuò)增表明實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可靠性。
• 如在一些樣品中擴(kuò)增不到內(nèi)參(270bp)，這種情況下可設(shè)置陰性對(duì)照（樣本為水），可擴(kuò)增到270bp的條帶。
• 如果樣品中含有PCR的抑制劑，可通過DNA提取去除。
• 如果細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的支原體污染，448-611bp擴(kuò)增產(chǎn)物將聚集或270bp的內(nèi)參將消除（見圖，泳道6）
• 低于100bp的低濃度片段，表明是二聚體或非特異性片段，而非陽性結(jié)果，這種情況不影響檢測(cè)結(jié)果的精度。

檢測(cè)結(jié)果示例：

Lane1:大腸桿菌基因組擴(kuò)增結(jié)果   Lane2:雜交瘤細(xì)胞DNA擴(kuò)增結(jié)果

Lane3:陰性對(duì)照（水）           Lane4:陽性對(duì)照

Lane5:抑制劑樣本               Lane6:嚴(yán)重支原體污染的細(xì)胞

Lane7:輕度支原體污染的細(xì)胞     Lane8:100bp DNA ladder