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鈣離子熒光探針FLUO-3AM應(yīng)用詳解
更新時間：2013-06-19
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| 一、Fluo-3AM的理化性質(zhì) 顏色及形狀：橘紅色液體 純度：，大于95%（液相） 溶解性：溶于DMSO 吸收波長/發(fā)射波長：506nm /526nm（低/高鈣） 消散系數(shù)：86000/Mcm（506nm） 保存與使用：粉狀的FLUO-3AM應(yīng)保存于-20度以上。建議使用DMSO作為溶媒。在溶解前，F(xiàn)LUO-3AM和DMSO均須放置至室溫。溶解過程可能會比較慢。用無水的DMSO溶解的FLUO-3AM長期保存，應(yīng)嚴格密封，并保存于-20度。使用前，將保存液放置至室溫后再打開。可避免AM探針在長期的保存過程中水解。 二、Fluo-3AM的工作原理 FLUO-3廣泛用于長波長的熒光鈣指示劑。其在506NM處被吸收，可以被氬離子激光的488nm激發(fā)光激發(fā)，便于檢測。FLUO-3在沒有同鈣結(jié)合的情況下，無熒光產(chǎn)生。但是，在與鈣結(jié)合后，熒光（526nm）增強至少40倍。Fluo-3 AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-3 AM進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強的熒光，zui大激發(fā)波長為506nm，zui大發(fā)射波長為526nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右，發(fā)射波長為525-530nm。 三、Fluo-3AM的應(yīng)用 1、過程概述 用于細胞內(nèi)鈣離子檢測時，F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM的適當(dāng)溶液和細胞一起在20-37℃孵育15-60分鐘進行熒光探針裝載，隨后適當(dāng)洗滌，洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內(nèi)*轉(zhuǎn)變成Fluo-3。然后在流式細胞儀上進行檢測。 2、Fluo-3AM使用液的配置 100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按實際需要的摩爾濃度折算，無水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲存液。如出現(xiàn)難溶現(xiàn)象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。 四、注意事項： 1、熒光染料有淬滅問題，應(yīng)盡量避光保存； 2、實驗時注意個人防護，戴手套、口罩； 五、應(yīng)用舉例 （一）配置與貯存 1、基本信息 分子量：1129.9 包裝單位重量：0.1mg 貯存濃度：5000μM/L 使用終濃度：5μM/L 2、貯存液的配制（5000μM/L） 按照說明書，計算0.1mg 的摩爾數(shù)為0.089μM ，則需加DMSO18uL，微量加樣器反復(fù)吹打混勻后分裝，按說明書要求避光-20度冰凍保存。 （二）應(yīng)用 每毫升細胞懸液中加入1 uL，則Fluo-3AM的使用終濃度為5μM/L 訂購信息：
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